細胞名稱：PK136小鼠X小鼠

　　描述：雜交瘤細胞系PK136分泌一種小鼠單克隆抗體（IgG2a），此抗體與小鼠NK細胞起反應。該細胞系由SP2/0-Ag14骨髓瘤和用CE小鼠脾細胞和骨髓細胞免疫的（C3H X BALB/C）F1小鼠的脾細胞融合而成。此抗體對NK特異且在有補體時有細胞毒作用。此抗體與不同小鼠株的細胞的反應方式，與常規的NK1.1抗血清的反應方式相符。

　　動物種別：小鼠X小鼠

　　性別：

　　組織來源：B淋巴細胞；雜交瘤；

　　形態：淋巴母細胞

　　培養基和添加劑：DMEM培養基(GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)或Hybri-Care，90%；優質胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

　　供應限制：A。僅供研究之用。

　　REFERENCE:J.Immunol.137:3742-3747,1986.PubMed:3782794 Hybridoma 3:301-303,1984.PubMed:6500587

　　PK136小鼠X小鼠培養步驟：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。

　　3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4.按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

　　2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

　　方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

　　方法三：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

　　1）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。棄培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入到凍存液中。